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下面是我司為大家講述一些牛熱休克蛋白27(HSP27)ELISA kit科研供應(yīng)商ELISA實(shí)驗(yàn)中的小技巧,希望對(duì)大家有所幫助!
1. 操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等,要先查看水育箱溫度,ELISA試劑盒是否符合要求。
2. 正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑,避免刮擦包被板底部。
3. 加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應(yīng)孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
4. 手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大,洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù),洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流,造成孔問污染,導(dǎo)致假陰性或假陽性。
5. 要保證加液量一致ELISA試劑盒我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn),造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯(cuò)誤。
6. 顯色液量不可過多加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng),顯色液量不能過多,以免顯色過強(qiáng)。
牛熱休克蛋白27(HSP27)ELISA kit科研供應(yīng)商間接法測(cè)抗體步驟:
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法,其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(二抗)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法,操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的樣本,保溫反應(yīng),樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物,
3)經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
4)加酶標(biāo)抗抗體,固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶,洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
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