大鼠唾液酸(SA) ELISA 檢測試劑盒 本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿 試驗原理: SA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知SA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將SA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中SA的濃度呈比例關系。 試劑盒內容及其配制 試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 | 96/48人份酶標板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 | 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 | 標準品:800mg/L | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進行稀稀 | 空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 | 標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 | 生物素標記的抗SA抗體 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 | 親和鏈酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 | 洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說明書進行稀釋 | 底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 | 底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 | 終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 | 標本稀釋液 | 1瓶(12ml) | 1瓶(6.0ml) | 即用型 | 自備材料 1. 蒸餾水。 2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3. 振蕩器及磁力攪拌器等。 安全性 1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。 2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 操作注意事項 1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。 2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。 3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。 4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。 5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。 7. 底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 樣品收集、處理及保存方法 1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液 5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 試劑的準備 1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行: 800 mg/L | (6號標準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 | 400 mg/L | (5號標準品) | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 | 200 mg/L | (4號標準品) | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 | 100 mg/L | (3號標準品) | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 | 50 mg/L | (2號標準品) | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 | 25 mg/L | (1號標準品) | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 | 0 mg/L | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 | 2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。 操作步驟 1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。 2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。 3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。 4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。 6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。 8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。 9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。 建議使用的實驗方案 | 標準品濃度(mg/L) | | A | 800 | 800 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | B | 400 | 400 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | C | 200 | 200 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | D | 100 | 100 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | E | 50 | 50 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | F | 25 | 25 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | G | 0 | 0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | H | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 局限 6號標準品以上的結果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。 試劑盒性能 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細胞因子反應。 3. 重復性:板內、板間變異系數(shù)均小于10%。 結果 判 斷 與 分 析 1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值 2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的SA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的SA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。 3、檢測值范圍:0-800mg/L 4、敏感度: 1.0 mg/L |